在现代生物技术领域中，基因工程是一项至关重要的技术，它广泛应用于医学、农业以及工业等多个领域。基因工程的核心在于对DNA进行精确的操作，以实现特定的功能或目标。本文将围绕基因工程的基本操作步骤展开讨论，特别是第四步。

第一步：获取目标基因。这是整个基因工程的第一步，也是最为关键的一步。我们需要从生物体中提取出我们想要研究或者利用的目标基因。这通常需要通过PCR扩增等方法来完成。

第二步：选择合适的载体。载体是基因工程中的一个重要工具，它可以将外源基因导入到宿主细胞中。常见的载体有质粒、病毒等。选择载体时要根据实验需求和宿主细胞类型来决定。

第三步：构建重组DNA分子。这一过程涉及到将目标基因插入到载体上，形成一个完整的重组DNA分子。这一步骤需要使用限制性内切酶和DNA连接酶等工具。

第四步：转化与筛选。这是基因工程的基本操作步骤之一，也是确保实验成功的关键环节。在这个阶段，我们将构建好的重组DNA分子导入到宿主细胞中，并通过一系列筛选手段确定那些已经成功接纳了外源基因的细胞。这个过程可能包括抗生素抗性筛选、荧光标记物检测等方式。

第五步：表达与鉴定。最后，我们需要验证这些被转化后的细胞是否能够正确地表达所引入的目标基因。这通常涉及蛋白质水平上的检测，如Western blotting或者ELISA等技术。

综上所述，基因工程的基本操作步骤涵盖了从目标基因的获取到最终产物的鉴定等多个方面。其中第四步——转化与筛选，在整个流程中起着承上启下的作用，对于保证实验结果的有效性和可靠性至关重要。只有经过严格筛选出来的阳性克隆才能进入下一步骤，从而为后续的研究提供可靠的数据支持。